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第二组，假手术组。
仅暴露神经，不刺激。
而第三则是阿托品组。
VNS 腹腔注射阿托品。
阿托品为胆碱能拮抗剂，这可以直接显示出VNS对胆碱能通路的效用！
手术步骤并不复杂。
无非是迷走神经电极植入，以及活体肠道成像窗口。
其实，和在彭月娇身上做VNS手术差不多。
只不过，此时的手术对象换成了杂交小鼠。
当然，其实还是有些细微区别的。
毕竟小鼠有可能会抓挠，因而针对小鼠的VNS中，电极直接接触神经干、以确保刺激效率。
最后，通过双光子实时成像采集eGFP强度。
而量化指标，胆碱能神经元激活率看eGFP和区域荧光强度变化；黏液分泌看tdTomato与囊泡出胞速率……
最终，得出结论：VNS组，刺激后十分钟，肠神经丛eGFP强度暴涨三倍，意味着胆碱能神经元被VNS手术激活。
同时，杯状细胞tdTomato信号爆发，黏液分泌速率提升四倍！
而相比之下，假手术组，则没有这些变化。
阿托品组由于有拮抗剂的存在，上述效应完全被阻断。
至此，足以证明VNS通过胆碱能通路促粘液分泌！
“接着就是VNS驱动阿克曼菌特异性定植了……”
此时，众人的心里更加紧张。
这是重中之重。
也是决定一切的关键！
如果能证明VNS可以增加阿克曼菌，这次的实验，就成功了一大半！
相反，若是得到相反的结果，恐怕之前的所有猜想都没有意义了。
“这次用的是什么小鼠？”
众人看向许秋。
许秋给出了介绍：“人源化菌群小鼠。
“具体来说，是无菌C57B-L/6小鼠灌胃健康人粪便菌液，其中含0.001%阿克曼菌。”
这等于是为此次试验量身定做的小鼠。
若非这里是协和，各种实验动物模型都能找到，可能仅仅是培育，就要数周的时间！
这也就是大平台的优势了。
换做是在临医，恐怕根本没法提供所需的各种实验动物！
许秋即便想要验证，可能也要当场自己选育、培养对应的小鼠，等真正做实验的时候可能已经是数个月之后的事情了。
而除开实验动物，此次所用的菌群追踪技术也尤为关键。
许秋在考察了协和研究所这边拥有的设备后，最终选定了FISH时空定位。
探针，选取的是Akk-405。
阿克曼菌-16S-rRNA-Cy5标记探针。
黏液层定位，则是WGA-Alexa488标记黏蛋白。
相比之下，成像方案就非常简单粗暴了。
直接麻醉下、经钢门**共聚焦纤维内镜，动态拍摄回肠末端，直接观察菌群。
“这套方案也堪称完美了。”
此时，了解到许秋的具体实验规划后，莫雷蒂等人都啧啧称奇。
实验室普遍的手法，是16S测序。
但，16S测序缺点不少。
它只能反映菌群总量变化、无法区分活菌死菌，而且采样的过程中难免会破坏肠道结构。
这种破坏，对于讲究严格对照实验的科研项目来说，是很严重的不确定性因素。
而许秋选用的FISH活体成像，却避开了这三个缺点，甚至将其转化为了优点。
首先，它可以实时观测菌-黏液空间的关系，不再机械式地只能查看菌群总量，而是能综合分析！
第二组，假手术组。
仅暴露神经，不刺激。
而第三则是阿托品组。
VNS 腹腔注射阿托品。
阿托品为胆碱能拮抗剂，这可以直接显示出VNS对胆碱能通路的效用！
手术步骤并不复杂。
无非是迷走神经电极植入，以及活体肠道成像窗口。
其实，和在彭月娇身上做VNS手术差不多。
只不过，此时的手术对象换成了杂交小鼠。
当然，其实还是有些细微区别的。
毕竟小鼠有可能会抓挠，因而针对小鼠的VNS中，电极直接接触神经干、以确保刺激效率。
最后，通过双光子实时成像采集eGFP强度。
而量化指标，胆碱能神经元激活率看eGFP和区域荧光强度变化；黏液分泌看tdTomato与囊泡出胞速率……
最终，得出结论：VNS组，刺激后十分钟，肠神经丛eGFP强度暴涨三倍，意味着胆碱能神经元被VNS手术激活。
同时，杯状细胞tdTomato信号爆发，黏液分泌速率提升四倍！
而相比之下，假手术组，则没有这些变化。
阿托品组由于有拮抗剂的存在，上述效应完全被阻断。
至此，足以证明VNS通过胆碱能通路促粘液分泌！
“接着就是VNS驱动阿克曼菌特异性定植了……”
此时，众人的心里更加紧张。
这是重中之重。
也是决定一切的关键！
如果能证明VNS可以增加阿克曼菌，这次的实验，就成功了一大半！
相反，若是得到相反的结果，恐怕之前的所有猜想都没有意义了。
“这次用的是什么小鼠？”
众人看向许秋。
许秋给出了介绍：“人源化菌群小鼠。
“具体来说，是无菌C57B-L/6小鼠灌胃健康人粪便菌液，其中含0.001%阿克曼菌。”
这等于是为此次试验量身定做的小鼠。
若非这里是协和，各种实验动物模型都能找到，可能仅仅是培育，就要数周的时间！
这也就是大平台的优势了。
换做是在临医，恐怕根本没法提供所需的各种实验动物！
许秋即便想要验证，可能也要当场自己选育、培养对应的小鼠，等真正做实验的时候可能已经是数个月之后的事情了。
而除开实验动物，此次所用的菌群追踪技术也尤为关键。
许秋在考察了协和研究所这边拥有的设备后，最终选定了FISH时空定位。
探针，选取的是Akk-405。
阿克曼菌-16S-rRNA-Cy5标记探针。
黏液层定位，则是WGA-Alexa488标记黏蛋白。
相比之下，成像方案就非常简单粗暴了。
直接麻醉下、经钢门**共聚焦纤维内镜，动态拍摄回肠末端，直接观察菌群。
“这套方案也堪称完美了。”
此时，了解到许秋的具体实验规划后，莫雷蒂等人都啧啧称奇。
实验室普遍的手法，是16S测序。
但，16S测序缺点不少。
它只能反映菌群总量变化、无法区分活菌死菌，而且采样的过程中难免会破坏肠道结构。
这种破坏，对于讲究严格对照实验的科研项目来说，是很严重的不确定性因素。
而许秋选用的FISH活体成像，却避开了这三个缺点，甚至将其转化为了优点。
首先，它可以实时观测菌-黏液空间的关系，不再机械式地只能查看菌群总量，而是能综合分析！